影響酶催化作用的因素主要有以下幾個方面：
一、底物濃度
在底物濃度較低時，反應速度隨底物濃度的增加而急劇上升，兩者呈正比關系。隨著底物濃度的進一步增高，反應速度不再成正比例增加，反應速度增加的幅度不斷下降。如果繼續增加底物濃度，反應速度將不再增加，表現出零級反應，此時酶的活性中心已被底物飽和。
二、酶濃度
在底物濃度足夠高的條件下，酶促反應速度與酶濃度成正比。
三、溫度
一般來說，在一定溫度范圍內，隨著溫度的升高，酶促反應速度加快。因為溫度升高可使分子運動加快，從而增加了分子間的碰撞頻率，使酶促反應的活化分子數增多。
但當溫度升高到一定限度時，酶的熱變性開始發生，導致酶活性下降甚至完w全喪失。通常，酶促反應的最適溫度是在一定條件下，酶活性最高時的溫度。不同的酶最適溫度不同。
四、pH
每一種酶只能在一定的pH范圍內表現出活性，在某一pH下酶活性最高，這個pH稱為該酶的最適pH。
pH對酶活性的影響主要是影響酶活性中心的某些必需基團、輔酶及許多底物的解離狀態。在過酸或過堿的環境下，酶的空間結構被破壞，導致酶活性喪失。
五、抑制劑
抑制劑能使酶的催化活性下降，但不引起酶蛋白變性。根據抑制劑與酶結合的緊密程度不同，可分為可逆性抑制劑和不可逆性抑制劑。
可逆性抑制劑與酶以非共價鍵結合，可用透析等物理方法除去抑制劑使酶恢復活性。
不可逆性抑制劑與酶以共價鍵結合，不能用透析等方法除去抑制劑使酶恢復活性。
不同的抑制劑作用機制不同，有的抑制劑與底物競爭酶的活性中心，從而阻礙底物與酶的結合，稱為競爭性抑制；有的抑制劑與酶活性中心以外的基團結合，使酶的構象改變而不能與底物結合，稱為非競爭性抑制。
六、激活劑
激活劑能提高酶的活性。激活劑大多為金屬離子，如鎂離子、鉀離子、錳離子等，也有一些小分子有機化合物。
激活劑的作用機制可能是與酶結合，改變酶的構象，從而使酶更易于與底物結合或提高酶的催化活性。
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