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    中文名：人褪黑素（MT）ELISA試劑盒

    別名：人褪黑素（MT）ELISA Kit

    產品規格：96T/48T

    供貨商：上海遠慕

    使用目的：用于測定血清、血漿及相關液體樣本中待測物質的含量。

    預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。

    特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應。

    用途：科研實驗等領域科學研究，不得用于臨床診斷

    人ELISA試劑盒實驗原理：

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入待測物質，再與HRP標記的待測物質抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。

    包含以下各組分：

    （1）結合物及標本的稀釋液；

    （2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

    （3）酶標記的抗原或抗體（結合物）；

    （4）酶的底物；

    （5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），ELISA試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）；

    （6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

    注意事項：

    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

    3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

    5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6.底物請避光保存。

    7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

    8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

    人褪黑素（MT）ELISA試劑盒操作步驟：

    實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫，試劑不能直接在37℃溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

    1、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50?l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測樣品10?l（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

    3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

    5、加酶：每孔加入酶標試劑50?l，空白孔除外。

    6、顯色：每孔先加入顯色劑A50?l，再加入顯色劑B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘。

    7、終止：每孔加終止液50ml，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

    8、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行

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